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    中草藥期刊:西紅花特征圖譜研究及真偽鑒別

    本研究發表于中草藥期刊2015年5月第46卷第9期。文章編號:0253-2670(2015)09-1378-03。DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2015.09.022。

    作者和單位

    姚建標、金輝輝、何厚洪、王如偉,作者單位是浙江康恩貝制藥股份有限公司和浙江省中藥制藥技術重點實驗室。

    中文摘要

    目的 建立一種西紅花Crocus sativus特征圖譜分析方法,并用以鑒別西紅花中摻假梔子Gardenia jasminoides。方法 采用HPLC法,色譜柱為ZorBax XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流動相為0.5%醋酸水溶液-0.5%醋酸甲醇溶液梯度洗脫,檢測波長為254nm,分析時間為45min,體積流量為1.0mL/min。結果 通過多批樣品的檢測,共標出8個特征峰,建立的分析方法有較好的重復性,能夠顯著區分西紅花和梔子。結論 方法穩定、可靠、簡便,為西紅花質量控制和真偽鑒別提供參考。

    英文摘要

    Objective To establish the method for the specific chromatograms analysis of Crocus sativus, so as to distinguish the active constituents between saffron and gardenia. Methods HPLC with ZorBax XDB-C18 column was used, the mobile phase was a linear gradient of methanol containing 0.5% acetic acid and water containing 0.5% acetic acid in 45min, the detection wavelength was set at 254nm and the flow-rate was 1.0mL/min. Results Multi batches of samples were analyzed to establish the specific chromatograms. Eight marked peaks were separated. The methodological evaluation showed that the method had a good repeatability. The active constituents between saffron and gardenia could be significantly distinguished by this method. Conclusion The method is simple, rapid, and accurate with good reproducibility and can be used for the quality control and identification of C. sativus.

    西紅花Crocus sativus L. 屬鳶尾科(Iridaceae)多年生草本植物,為鳶尾科植物番紅花的干燥柱頭,有活血化瘀、涼血解毒、解郁安神之功效,用于經閉、產后瘀阻、溫毒發斑、憂郁痞悶、驚悸發狂等癥[1]。因其經印度轉入中國西藏再銷往內地,又稱藏紅花、番紅花[2]。西紅花的主要成分為西紅花苷,這類化合物是胡蘿卜烯類化合物在植物體內被氧化的產物,包括西紅花苷I、西紅花苷II、西紅花苷III和西紅花酸等[3-4]。由于西紅花產地較多,各產品質量差異較大,又因其價格昂貴,致使本品參偽和偽品時有發生[5]。本實驗選取5 批不同年份建德產西紅花藥材及2 批國外產西紅花藥材,采用HPLC 法,建立了西紅花藥材的特征指紋圖譜,為西紅花藥材的質量控制和鑒別提供科學依據。同時對西紅花藥材中摻假梔子的情況進行研究,并初步建立了一種行之有效的鑒別方法。

    1 儀器與試藥

    Agilent 1260系列高效液相色譜儀, 配置G1311B四元泵,G4212B DAD檢測器,G1329B自動進樣器,Chemstation(Rev.C.01.05)色譜工作站。色譜甲醇(Merck 公司),二次重蒸水,其余試劑均為分析純。西紅花藥材均由建德市三都西紅花專業合作社提供,符合《中國藥典》2010 年版一部西紅花項下有關各項規定,經浙江工業大學王平教授鑒定為西紅花Crocus sativus L.。樣品信息見表1。梔子苷、西紅花苷II、西紅花苷I對照品(批號111588-200501)、梔子Gardenia jasminoides Ellis對照藥材(批號120986-200303)均購自中國食品藥品檢定研究院。

    表1 樣品信息

    表1 樣品信息

    2 方法與結果

    2.1 檢測波長的確定

    吸取上述樣品溶液10μL進樣,以0.5%醋酸甲醇溶液-0.5%醋酸水溶液為流動相,利用DAD 檢測器進行全波段掃描檢測分析,結果表明,供試品溶液中的有效成分西紅花苷I、西紅花苷II在440nm吸收最強,但其他成分在該波長下相應較小,而在254、312nm波長下,還有較多的其他特征峰出現,可見440nm不合適作為特征圖譜的檢測波長。相比于312、254nm波長條件下,所反映的各特征峰響應值更大,信息更清晰,且各特征峰分離較好,通過綜合評估,確定254nm為最佳檢測波長。

    2.2 色譜條件

    參考相關文獻方法[6],對色譜條件進行了優化。色譜柱:Zorbax XDB C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;流動相為0.5%醋酸水(A)-0.5%醋酸甲醇(B)溶液,采用梯度洗脫:0~40min,70%A;40~45min,100%A。體積流量1.0mL/min;檢測波長254nm;分析時間45min;進樣量10μL。2.3 對照品溶液的配制取西紅花苷I 對照品適量,精密稱定,加甲醇制成質量濃度為30μg/mL 的對照品溶液,即得。

    2.4 供試品溶液的制備

    取西紅花藥材粉末約100mg,置50mL具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇水溶液20mL,稱定質量,超聲處理30min,取出,放冷,稱定質量。用50%甲醇水溶液補足減失質量,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

    2.5 參照峰的選擇

    西紅花所含苷類活性成分主要為西紅花苷I、西紅花苷II、西紅花III、西紅花苷IV。其中以西紅花苷I量較高,紫外吸收較強,且有法定的對照品供應。因此,本法確定西紅花苷I為特征圖譜的參照峰(S)。

    2.6 方法學考察

    2.6.1 精密度試驗 取同一批西紅花,按“2.3”項方法制備,連續進樣6 次。結果顯示,各特征峰的峰面積西紅花苷I參照峰的比值的RSD均小于5%,說明儀器精密度良好。

    2.6.2 穩定性試驗 取同一批西紅花,按“2.3”項方法制備,分別于0、2、4、8、12、24h內進行測定,結果顯示,各特征峰與西紅花苷I的峰面積比值RSD良好,顯示溶液中各特征成分在24h內穩定。

    2.6.3 重復性試驗 取同一批西紅花供試品6份,精密稱定,按“2.3”項方法制備,結果表明,6次試驗中,各特征峰的峰面積與西紅花苷I參照峰的比值的RSD均小于5%,說明該法重復性良好。

    2.7 特征圖譜的建立

    按“2.2”項條件同時測定多批不同年份、不同產地西紅花藥材,通過對比特征圖譜,發現不同產地與不同年份的西紅花藥材雖然有效成分的量略有差異,但其特征圖譜基本一致;254nm條件下檢測,各色譜峰分離良好,其中8個特征峰比較明確。西紅花藥材的特征峰圖譜見圖1。

    圖1 西紅花藥材特征圖譜

    圖1 西紅花藥材特征圖譜

    2.8 西紅花的真偽鑒別

    按“2.4”項方法制備梔子對照藥材溶液,采用上述特征圖譜的分析方法對西紅花藥材與梔子對照藥材在不同波長下進行比較研究,結果見圖2。圖2顯示,440nm條件下,西紅花和梔子藥材共同含有西紅花苷類成分,其他特征峰也非常類似;但在254nm條件下,除西紅花苷特征峰以外,2種藥材各自還有其特征吸收峰。梔子苷在梔子藥材中特征吸收最強,而在西紅花藥材中吸收較弱,通過比較各批西紅花和梔子中2、6號峰的峰面積比,可初步判斷是否摻入梔子。

    圖2 西紅花與梔子藥材HPLC 圖

    圖2 西紅花與梔子藥材HPLC 圖

    正常情況下梔子藥材中的2 號峰與6號峰的峰面積之比是西紅花2號與6號峰峰面積比50倍以上,而不同產地及不同年份的西紅花藥材,只要保存得當,其梔子苷和西紅花苷的量相對穩定,其峰面積比值一般在0.05~0.30。因此,本研究把2號峰與6號峰的峰面積之比作為判斷西紅花中是否摻有梔子的一個參數,以正常西紅花藥材中梔子苷與西紅花苷I 峰比最大值上浮約50%,暫定峰面積比(2 號/6 號)≤0.5為指標。該參數值越大,說明樣品中摻入梔子的可能性越大。樣品1~7的梔子苷與西紅花苷I 峰面積比分別為0.11、0.07、0.08、0.10、0.07、0.31、0.07,梔子藥材為16.25。

    3 討論

    特征圖譜因其可從整體上實現質量控制,有利于中藥質量穩定和有效,近幾年在中藥及中成藥領域應用較廣,《中國藥典》2010 年版收載HPLC 特征圖譜就有11項。特征圖譜利用一組特征峰進行中藥質量控制,它繼承了指紋圖譜綜合評價的優點又兼顧了中藥成分的復雜和多變性,強調的是其特征性成分而非全部,較指紋圖譜更加符合中藥和中成藥的具體實際,具有更廣闊的發展空間。

    西紅花作為一種名貴藥材,其療效可靠,貨源稀少,價格高昂,導致市場上偽品、摻雜品較多[7]。本研究對比西紅花藥材在2 種不同波長下的HPLC圖,最終選擇254nm為本法的檢測波長,通過比較多批作不同產地不同年份的西紅花藥材,以西紅花苷I 為參照峰,確定了8個特征峰,建立了一個完整的西紅花特征圖譜方法,為西紅花藥材的鑒別和質量控制提供了科學依據。

    由于西紅花藥材和梔子藥材在440nm波長下液相色譜行為非常相似,而在254nm條件下,西紅花與梔子的特征峰存在顯著差異,因此,通過本特征圖譜方法,確定了一個有效區分這2種藥材的鑒別方法,為西紅花藥材的真偽鑒別提供了又一種科學的方法。

    參考文獻

    (共7條)
    [1] 中國藥典 [S]. 一部. 2010.
    [2] 何常明, 謝曉梅, 何美蓮, 等. 西紅花中西紅花苷-1和西紅花苷-2含量測定方法的建立 [J]. 藥物分析雜志, 2006, 26(9): 1270-1273.
    [3] 周素娣, 周錦祥. 國產西紅花化學成分的研究 [J]. 中草藥, 1997, 28(12): 715-716.
    [4] 何美蓮, 陳家寬, 周銅水. 番紅花化學成分及生物活性研究進展 [J]. 中草藥, 2006, 37(3): 466-470.
    [5] 王玉英, 林慧萍, 李水福. 西紅花的真偽優劣檢定 [J]. 中草藥, 2010, 41(7): 1194-1195.
    [6] 曾水云. 西紅花藥材高效液相色譜指紋圖譜研究及不同產地藥材譜比較 [J]. 中成藥, 2004, 26(9): 689-692.
    [7] 蘭 衛, 陶 寧. 新疆產西紅花的質量評價 [J]. 中草藥, 2012, 43(2): 380-382.


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    標簽:西紅花 真偽 鑒別 研究 中草藥 期刊

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