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    鐵皮石斛組培技術

    鐵皮石斛的組織培養技術,大都以莖段、根尖、原球莖、莖尖和種胚等為外植體。除了固體培養外,近幾年來還出現了鐵皮石斛液體懸浮培養。鐵皮石斛組培技術的成熟促進了鐵皮石斛產業的發展。

    鐵皮石斛組培

    一、鐵皮石斛組培技術

    (1)莖段培養

    1.培養條件

    2.取材與消毒

    從鐵皮石斛植株上切下長2~5cm的幼嫩莖段,在流水下沖洗,用刷子蘸少許洗衣粉水溶液輕輕刷洗,并經自來水充分洗凈。在超凈工作臺上將莖段放置在75%的酒精中消毒30s后,再用0.1%的HgClz水溶液浸泡8~10min,無菌水沖洗5~6次。

    3.誘導培養

    用解剖刀將鐵皮石斛的幼嫩莖段切下,接種在誘導培養基①中進行培養。15~20天后,外植體開始萌動,莖段膨大,切面及頂部組織形成疏松組織。繼續培養20天后,轉入培養基②中,切面及頂部膨大組織的表面形成凹凸不平的顆粒物,隨著培養時間的延長,顆粒物長大形成直徑1~2mm的類原球莖顆粒物。

    4.增殖培養

    將誘導形成的原球莖轉入到增殖培養基中,原球莖增殖速度很快,增殖倍數可達3~4倍,同時部分原球莖開始分化出芽點并長出1~2片小葉,原球莖的增殖與芽分化同時進行。

    5.生根培養

    待增殖芽數量較多時,將高1~2cm、帶有2~3片葉的小芽切下轉入生根培養基上進行生根培養。培養30天左右,基部開始出現2~3條約1cm長的白色根,隨后逐漸伸長,生根率達到90%以上。

    6.出瓶苗的過渡管理

    當苗高3cm以上、具3~4片葉時,便可出瓶移栽。移栽前,將生根瓶苗打開瓶蓋,移至常溫下煉苗7天,然后將瓶苗取出,洗去附著在根部的培養基,用 0.01%的高錳酸鉀溶液浸泡8~10min,栽種于已滅菌的碎樹皮基質中(移栽前澆透水),放置在遮光度50%~60%、濕度達80%以上的溫室中,2 個月后,成活率達90%以上。

    鐵皮石斛組培技術

    鐵皮石斛組培苗

    (2)種子培養(胚培養)

    取人工授粉的鐵皮石斛果實,用75%的酒精表面消毒,30秒后再用0.1%升汞消毒8分鐘,無菌水沖洗4—5次。

    在無菌操作下,把果實切成0.1mm方塊,接種到培養基上,每瓶3—5塊。研究結果表明,N6培養基對種子萌發和生長最好,蔗糖濃度2%最佳,NAA濃度0.2—0.5mg/L最適合胚的萌發和生長;種子培養中加入椰乳對胚萌發和萌發后的初期生長起促進作用:而香蕉汁對繼代培養中石斛的生根和壯苗起促進作用,生根和壯苗培養中不加入NAA,只用N6+10%香蕉汁,苗長得更粗壯。

    培養溫度25—28C,光照度1600–20001x,每日10—12小時。種子萌發后,轉管3—4次,當幼苗長出4—5片真葉并具有3—4條1—2cm長的根時,可將試管苗進行練苗后移栽。

    在實驗中尚發現,不同胚齡培養,其萌發率不同:胚齡45天以下,萌發率極低,萌發時間長;60天胚齡的胚具34個細胞,萌發率為6%;90天胚齡的胚細胞為74個,萌發率為87%:120天胚齡的細胞數為90個,萌發率95%以上。

    實驗表明,組織培養的最適胚齡以種子成熟時較好。將萌芽石斛繼代培養于N6+10%香蕉汁生根壯苗培養基中,苗長得更粗壯。

    鐵皮石斛組培苗

    (3)莖尖培養

    取石斛當年萌發的嫩莖尖,用10%次氯酸鈉消毒10分鐘,無菌水沖洗4—5次后接種到培養基上。

    培養溫度為25—28C,光照度1600—20001x,每日10一12小時。研究結果表明,在MS+NAA0.2mg/L+6- BA0.5mg/l培養基中培養30天左右,外植體則可誘導出大小不一的白色顆粒狀愈傷組織,再過20天形成不定芽;將愈傷組織和不定芽切割開,再接種到 MS+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/l中,愈傷組織會增殖并產生不定芽:再將不定芽移到N6+10%香蕉汁中培養30天左右,則會生根長成植株。

    (4)原球莖培養

    鐵皮石斛原球莖懸浮系,用以制作人工種子繁殖體。

    實驗表明:懸浮培養的最適培養基為1/4MS+維生素C40mg/L,pH5.6,搖床轉速為50r/min,15天繼代一次,黑暗培養。

    培養基中添加ABA0.5mg/L預培養30天,原球莖的質量提高、同步性更好。可以得到分散性好、整齊均一的原球莖。

    (5)根尖培養

    鐵皮石斛離體根尖經愈傷組織形成體細胞胚及直接產生體細胞胚再生植株的過程。

    離體根尖在B5+2,4一D1.Omg/L+6-BA3.0mg/L中培養后形成愈傷組織,將其轉接到B5+NAAO.5mg/I。+6- BAl.0mg/L培養基中培養14~20天后形成類原球莖,類原球莖分化生成葉和根,并最終形成完整幼苗;而培養在B5+6-BAl.0mg/L中的離體根尖直接轉變成類原球莖,而發育成完整小苗。

    (6)種子無菌苗培養

    以野生鐵皮石斛種子為外植體,研究了不同基本培養基、天然附加物和植物生長調節劑對鐵皮石斛種子萌發、原球莖增殖與分化和試管苗生根的影響。

    結果表明,鐵皮石斛種子萌發的適宜培養基為MSq-NAA0.5mg/L+土豆汁10%;原球莖增殖與分化的適宜培養基為MS+6一BA0.5rag/L+NAA0.1mg/L+土豆汁10%;試管苗生根的適宜培養基為Ms+NAA0.2mg/I。+土豆汁10%。

    在此條件下建立的鐵皮石斛快速繁殖體系,原球莖在增殖與分化培養基上培養3個月左右,可分化出大量高約1~2cm的試管苗,轉入生根培養基中培養3個月左右后誘導出大量根系,即可進行大田移栽。

    鐵皮石斛組培苗

    二、鐵皮石斛組培苗范圍化種植管理技巧

    (1)、馴化前的預備工作

    1、煉苗

    馴化前將瓶苗移至煉苗房進行2-3周的煉苗,讓瓶苗從關閉穩固的環境向開放變更的環境過渡,緩緩適應天然環境,等瓶苗成長期硬朗,葉色濃綠時出瓶種植,出瓶苗請求是增殖代數在10代以內,苗長3cm以上,莖粗0.2cm以上,莖有3-4個節間,長有4-6片葉,葉畸形開展,葉色嫩綠或蔥綠,根長 3cm以上,有3-5條根,根皮色中帶綠,無玄色根,無畸形,無變異。

    2、出瓶

    出瓶前先將瓶蓋翻開,讓瓶苗在室外空氣中放2-3天,讓其適應自然溫濕度,在洗苗時將造就基與小苗一起微微掏出,整潔放置于盆中待蕩滌,污染苗和裸根苗或少根苗分辨放置,正常組培苗先在自來水洗凈培育基,特殊是洗掉瓊脂,免得瓊脂發霉引起爛根,再換自來水清洗一次,最好一邊洗一邊對小苗進行分級,可以按高及粗度分三個等級,這樣馴化時便利針對不同級別的苗采用不同的管理辦法,以便進步苗的成活率和培養出整齊一致的壯苗對裸根或少根組培苗經過上述清洗后,不按期需將小苗根部置于100cm/L生根粉中浸泡15分鐘以進行生根引誘,污染苗經由清洗后,用阿米西達浸泡2分鐘,后期管理切當可有效節制傳染的發生。

    3、基質

    基質的籌備移栽鐵皮石斛組培苗要就地取材,選擇合適生長的基質,鐵皮石斛的根為氣生根,有顯明的好氣性和淺根性,因此,要求基質以蓬松透氣、排水良好且能保肥,不易發霉,無病菌和害蟲暗藏者為宜,可以選擇腐化松樹皮為栽培基質,基質在使用前應當經高溫消毒,假如使用莖葉的,應該堆泣,浸泡和蒸煮等處置,某些基質體積技術較厚的可用開水煮高溫蒸氣蒸20分鐘后,取出讓其自然冷卻涼干待用,目的是將基質內部暗藏的蟲卵和病菌殺逝世,減少日后栽培上病蟲害發生的機率,基質含水量以60%左右為宜,可增加0.5%三無復合肥(N:P:K:=15%:15%15%)。

    4、馴化

    場地的抉擇鐵皮石斛喜暖和、多霧、大風、干凈、散射光的環境,切忌陽光直射、暴曬,在栽培進程中要發明條件給予鐵皮石斛最佳的生長環境,鐵皮石斛原產區大多處于溫帶和亞熱帶,全年氣象溫暖、潮濕,冬季氣溫都在0℃以上,依據鐵皮石斛的生長習慣,就要斟酌馴化場地的光照、溫度、通風等天然因素,筆者以為最好取舍在設施大棚內移栽,而且要移載在高架種植畦上,這樣容易滿意鐵皮石斛生長的最佳前提,并且良多因素輕易把持.

    在建造鐵皮石斛組培苗馴化大棚時要知足以下條件:

    (1)馴化大棚要通電通水,通路要求,棚寬6M,長30M,棚肩高1.7M以上,棚頂高2.8M以上,棚頂籠罩塑料無滴薄膜70%遮蔭度的遮陽網,棚內安裝有自來水管,大棚周圍和進口裝有40目的防蟲網,有條件的,棚內還要裝有自動或手動掌握的噴霧體系,(最好既能噴霧又能噴肥、噴藥),這樣可以防曬、防蟲、保溫、透氣、還能大大減輕勞動量。

    (2)棚內搭建畦底架空的種植畦,可用鋼、磚頭、木板或方條等資料作為種植畦的框架,然后鋪設孔徑為0.3-0.5cm基質漏不去的塑料平板作為栽培基質的支撐面,也可用石棉瓦作支持面,每隔10cm打一小孔用來排水透氣,要求畦寬1-1.4cm,畦長度可自定,畦底架空高度10-50cm,種植畦上方裝有可隨時噴霧的噴頭,噴霧時間最好能控制,不條件的,也可用噴霧器來取代, 搭建這種高架種植的目的是為了使水分和透氣控制容易,從而給予組培苗生長最佳的水分不至于積水,保證通風透氣,又能同時噴肥、噴藥,小苗成活率高,大面積馴化時大大節儉勞能源。

    (3)有條件的還可在棚外高于棚頂1m處裝置主動噴淋設施,在高溫的夏季每隔1小時對棚頂薄膜進行噴不,目標是為了加速棚內降溫過程。

    (4)種植畦上鋪4-6cm厚的基質攤平,移載前用0.3%高猛酸鉀或1000倍多菌靈藥液對基質進行名義噴曬消毒。

    (2)馴化時節和方式

    1、馴化季節種植小苗最佳節令是日均勻氣溫在15-28℃,氣溫過低或過高均不宜出瓶種植.

    普通來說,在鐵皮石斛主產地,除了最冷的一、二月以及最熱的七、八月,均可種植,局部海拔地域除了十仲春至次年的三月,其余時光均可種植,最好馴化時間為3-5月份。

    2、種植方法種植時在種植畦的基質上用手指挖2-3cm深的小洞,輕輕反洗凈的鐵皮石斛組培苗根部放入小洞內然后用基質蓋好,注意不要弄斷石斛的肉質根,不要用基質壓實根部,讓少量根露在空氣中,不等同級的小苗和裸根的或少根的最好離開種,以便管理,移栽密度為150/平方,株行距為 6cm×8cm。

    鐵皮石斛組培苗

    (3)馴化管理

    1、溫度治理

    人工馴化鐵皮石斛組培苗,要滿意冬暖夏涼的要求,梵網經,組培苗生長合適溫度為16-30℃夏季溫度高時大棚內必需通風散熱,并常噴霧來降溫保溫,天天噴霧3-5次,每次噴霧2-5分鐘:冬季氣溫低時要求大棚內四處密封好,以防凍傷苗。

    2、濕度管理

    剛移栽的組培苗對水分極敏感,對基質水分的管理原則是“寧少夠”以保障基質含水量在60-70%為宜,簡略的斷定尺度,手抓基質使勁擠,以擠不出水滴即可,基質噴霧過多則漬水爛根,溫度高濕度大時還易引發軟腐病大規模發生,缺水則生長遲緩,干涸成活率低,移栽后一周內(幼苗尚未發新根)濕度空氣保持 10%左右,一周后,植株開始發根可保持70-80%空氣濕度,種植畦干濕交替有利發根發芽。

    3、肥水管理

    大棚馴化期間的施肥以葉面肥為主,由于鐵皮石斛為氣生根,因此要噴施相宜的葉面肥作為養分液,持續供應植株充分的營養,以利早發根長新芽,葉面肥可以挑選硝酸鉀,磷酸二氫鉀,腐植酸類葉面肥,入口復合肥,稀釋的ms培養基或一些專用肥(如花多多系列)等,一般移栽后10天,植株新根發生生開始噴施 0.1%的葉面肥如硝酸鉀或磷酸二氫鉀,7-10天噴一次,連續三次,長出新芽后每隔10-15天噴0.3%復合肥等,一般情形下施肥后兩天結束澆水,若空氣對流太大,則視基質干濕度恰當噴霧補水。

    4、病蟲害防治

    以防備為主,聯合防治為準則,因為鐵皮石斛是中藥材,屬于特殊商品,因此在防治過程中,制止使用高毒,高殘留農藥,有限度地使用部門化學農藥,盡量使用物理辦法,在必須施用時嚴格履行中藥材標準出產農藥使用原則,選用多少種不同類農藥品種進行交替使用,防止長期應用單一農藥種類,以延緩病蟲害抗藥性的產生,嚴厲控制用藥量和用藥時代,盡量減少農藥殘留。


    標簽:技術 鐵皮石斛 組培

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